Plaque reduction neutralization test
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Der Neutralisationstest (NT) ist eine Variante des Plaque-Assays, mit dem neutralisierende Antikörper gegen bestimmte Viren im Serum eines Patienten oder eines Impflings nachgewiesen werden können.
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The plaque reduction neutralization test is used to quantify the titer of neutralizing antibody for a virus. The serum sample or solution of antibody to be tested is diluted and mixed with a viral suspension. This is incubated to allow the antibody to react with the virus. This is poured over a confluent monolayer of host cells. The surface of the cell layer is covered in a layer of agar or carboxymethyl cellulose to prevent the virus from spreading indiscriminately. The concentration of plaque forming units can be estimated by the number of plaques (regions of infected cells) formed after a few days. Depending on the virus, the plaque forming units are measured by microscopic observation, fluorescent antibodies or specific dyes that react with infected cells.
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Le test de séroneutralisation par réduction des plages de lyse permet de quantifier le titre d'anticorps neutralisants contre un virus. L'échantillon de sérum, ou la solution d'anticorps, à tester est diluée et mélangée à une suspension virale. Le tout est ensuite incubé, afin de permettre à l'anticorps de réagir avec le virus, puis réparti sur une culture cellulaire de l'hôte du virus. La surface du tapis cellulaire est couverte par une couche d'agar-agar ou de carboxyméthylcellulose, ce qui empêche le virus de se répandre de façon indiscriminée dans la culture cellulaire. La concentration du virus en (en) peut être estimée par le nombre de plaques (régions de cellules infectés) après quelques jours. Selon le virus, les unités formant plages sont mesurées par observation microscopique, a
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Neutralisationstest
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Séroneutralisation par réduction des plages de lyse
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Plaque reduction neutralization test
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Der Neutralisationstest (NT) ist eine Variante des Plaque-Assays, mit dem neutralisierende Antikörper gegen bestimmte Viren im Serum eines Patienten oder eines Impflings nachgewiesen werden können.
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Le test de séroneutralisation par réduction des plages de lyse permet de quantifier le titre d'anticorps neutralisants contre un virus. L'échantillon de sérum, ou la solution d'anticorps, à tester est diluée et mélangée à une suspension virale. Le tout est ensuite incubé, afin de permettre à l'anticorps de réagir avec le virus, puis réparti sur une culture cellulaire de l'hôte du virus. La surface du tapis cellulaire est couverte par une couche d'agar-agar ou de carboxyméthylcellulose, ce qui empêche le virus de se répandre de façon indiscriminée dans la culture cellulaire. La concentration du virus en (en) peut être estimée par le nombre de plaques (régions de cellules infectés) après quelques jours. Selon le virus, les unités formant plages sont mesurées par observation microscopique, anticorps fluorescent ou après l'usage de colorants spécifiques qui réagissent avec les cellules infectées. La concentration de sérum nécessaire pour réduire le nombre de plaques de 50% (PRNT50) par rapport au virus seul donne la mesure de la quantité d'anticorps et de leur efficacité. Cette technique est actuellement considérée comme étant de référence pour la détection et la mesure d'anticorps pouvant neutraliser des virus à l'origine de beaucoup de pathologies. Elle a une sensibilité plus grande que d'autres tests comme l'hémagglutination et de nombreuses techniques immuno-enzymatiques commerciales, sans compromettre la spécificité. Ce test est cependant relativement encombrant et surtout plus long (quelques jours) que les kits commerciaux de techniques immuno-enzymatiques, qui donnent des résultats plus rapidement (quelques minutes à quelques heures).
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The plaque reduction neutralization test is used to quantify the titer of neutralizing antibody for a virus. The serum sample or solution of antibody to be tested is diluted and mixed with a viral suspension. This is incubated to allow the antibody to react with the virus. This is poured over a confluent monolayer of host cells. The surface of the cell layer is covered in a layer of agar or carboxymethyl cellulose to prevent the virus from spreading indiscriminately. The concentration of plaque forming units can be estimated by the number of plaques (regions of infected cells) formed after a few days. Depending on the virus, the plaque forming units are measured by microscopic observation, fluorescent antibodies or specific dyes that react with infected cells. The concentration of serum to reduce the number of plaques by 50% compared to the serum free virus gives the measure of how much antibody is present or how effective it is. This measurement is denoted as the PRNT50 value. Currently it is considered to be the "gold standard" for detecting and measuring antibodies that can neutralise the viruses that cause many diseases. It has a higher sensitivity than other tests like hemagglutination and many commercial Enzyme immunoassay without compromising specificity. Moreover, it is more specific than other serological methods for the diagnosis of some arbovirus. However, the test is relatively cumbersome and time intensive (few days) relative to EIA kits that give quick results (usually several minutes to afew hours). An issue with this assay that has recently been identified is that the neutralization ability of the antibodies is dependent on the virion maturation state and the cell-type used in the assay. Therefore, if the wrong cell line is used for the assay it may seem that the antibodies have neutralization ability when they actually do not, or vice versa they may seem ineffective when they actually possess neutralization ability.
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