CyTOF
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Cytometry by time of flight, or CyTOF, is an application of mass cytometry used to quantify labeled targets on the surface and interior of single cells. CyTOF allows the quantification of multiple cellular components simultaneously using an ICP-MS detector.
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La citometría por tiempo de vuelo , o CyTOF , es una aplicación de citometría de masas que se utiliza para cuantificar objetivos marcados en la superficie y el interior de células individuales. CyTOF permite la cuantificación de múltiples componentes celulares simultáneamente usando un detector ICP-MS .
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Cytometry by time of flight, or CyTOF, is an application of mass cytometry used to quantify labeled targets on the surface and interior of single cells. CyTOF allows the quantification of multiple cellular components simultaneously using an ICP-MS detector. CyTOF takes advantage of immunolabeling to quantify proteins, carbohydrates or lipids in a cell. Targets are selected to answer a specific research question and are labeled with lanthanide metal tagged antibodies. Labeled cells are nebulized and mixed with heated argon gas to dry the cell containing particles. The sample-gas mixture is focused and ignited with an argon plasma torch. This breaks the cells into their individual atoms and creates an ion cloud. Abundant low weight ions generated from environmental air and biological molecules are removed using a quadrupole mass analyzer. The remaining heavy ions from the antibody tags are quantified by Time-of-flight mass spectrometry. Ion abundances correlate with the amount of target per cell and can be used to infer cellular qualities. Mass spectrometry's sensitivity to detect different ions allows measurements of upwards of 50 targets per cell while avoiding issues with spectral overlap seen when using fluorescent probes. However, this sensitivity also means trace heavy metal contamination is a concern. Using large numbers of probes creates new problems in analyzing the high dimensional data generated.
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La citometría por tiempo de vuelo , o CyTOF , es una aplicación de citometría de masas que se utiliza para cuantificar objetivos marcados en la superficie y el interior de células individuales. CyTOF permite la cuantificación de múltiples componentes celulares simultáneamente usando un detector ICP-MS . CyTOF aprovecha el inmunomarcaje para cuantificar proteínas , carbohidratos o lípidos en una célula. Los objetivos se seleccionan para responder a una pregunta de investigación específica y se marcan con anticuerpos marcados con metal lantánido . Las células marcadas se nebulizan y se mezclan con gas argón calentado para secar las partículas que contienen células. La mezcla de gas de muestra se enfoca y se enciende con un soplete de plasma de argón . Esto rompe las células en sus átomos individuales y crea una nube de iones. Los abundantes iones de bajo peso generados a partir del aire ambiental y las moléculas biológicas se eliminan mediante un analizador de masas de cuadrupolo . Los iones pesados restantes de las etiquetas de anticuerpos se cuantifican medianteEspectrometría de masas de tiempo de vuelo . abundancia de iones se correlaciona con la cantidad de diana por célula y se puede utilizar para inferir las cualidades celulares. La sensibilidad de la espectrometría de masas para detectar diferentes iones permite realizar mediciones de más de 50 objetivos por celda y evita los problemas de superposición espectral que se observan cuando se utilizan sondas fluorescentes. Sin embargo, esta sensibilidad también significa que la contaminación por trazas de metales pesados es una preocupación. El uso de un gran número de sondas crea nuevos problemas en el análisis de los datos de gran dimensión generados.
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